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LONZA 4D-Nucleofector LV单元,即LV大体积转染模块,是LONZA 4D-Nucleofector 细胞核转染系统中的一员。作为不依赖于细胞的非病毒转染,Nucleofector核转染技术,结合传统的电转染技术和细胞特异性电转染液(根据细胞种类优化),通过核转染仪内置的电转程序(根据细胞种类优化),可将质粒DNA、DNA单链、mRNA或siRNA等,转入原代细胞或细胞系的细胞质中,实现瞬时转染,或直接进入细胞核,实现稳定转染。(阅读前文了解4D-Nucleofector核转系统

 

LONZA 4D-Nucleofector LV大体积转染模块,可直接使用已在X模块上验证的转染条件,实现封闭、大规模的细胞连续转染,细胞数量可达1*10^7至1*10^9。

LONZA 4D-Nucleofector LV Unit 真核细胞大体积细胞核转染系统 LONZA中国一级代理商北京泽平
 

LV模块提供2种转染方式:

1、1mL电转盘:通过手动灌注,一次可转染1*10^7至1*10^8数量细胞;

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2、20x1mL电转盘:通过导管连接储液罐或储液袋灌注,每次进样1mL,连续自动处理20mL,一批可快速转染1*10^9数量细胞。

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Nucleofector核转技术具有转染效率高、重复性好、转染后细胞活性高、转染后细胞功能良好的特点,针对GMP流程可提供GMP标准的转染试剂盒(预计2019年底或明年初上市)、系统软件符合21CFR part11要求、可提供CoO、CoA质控文件、IQ、OQ文档等。其多种转染模块,可满足转染细胞数量和通量的不同需求,适用于免疫治疗研究的各个阶段:

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1、研发阶段:

内容:鉴定药物靶标,方法验证,应用设置

需求:高效的免疫细胞转染

适用:X模块

2、临床前阶段:

内容:动物或细胞实验,疗效、毒性、药物代谢动力学数据,工艺开发

需求:规模化,标准化

适用:X模块或LV模块

3、临床阶段:

内容:临床研究,小规模生产

需求:规模化,质量控制

适用:LV模块

4、商业化阶段:

内容:商业化应用,大规模生产

需求:生产质量,质控

适用:LV模块

 

LONZA Nucleofector 核转染技术目前常用于人原代T细胞转染,由于其与CRISPR和其他基因组编辑技术的实用性,成为基因治疗的理想研究工具。

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人T细胞转染结果:用pmaxGFP载体质粒转染人PBMCs细胞,CD3阳性T细胞染色和检测。

 

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人T细胞中CRISPR结果:用Cas9/gRNA核糖核蛋白核转染预刺激人T细胞。

 

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人T细胞ZFN mRNA转染结果:分别用少量(100μL)和大量(1mL)的GFP mRNA或ZFN

 

参考文献:

1、使用LONZA 4D-Nucleofector X单元

 

Engineering of CRISPR-Cas12b for human genome editing.(用于人类基因组编辑的CRISPR-Cas12b) Strecker J, et al.Nat Commun. 2019 Jan 22;10(1):212. doi: 10.1038/s41467-018-08224-4. Cell used in:T cell,human

研究者团队着重关注第三种II型蛋白效应核酸酶:Cas12b,然而Cas 12b在48℃时表现出最佳的DNA切割活性,而在37℃时野生型BhCas12b会优先切割no-target DNA,导致编辑效率降低。研究者通过结合多种方法使BhCas12b的功能获得突变,从而克服了这一限制。并且在细胞系和人原代T细胞中获得了很好的编辑效率,与Cas9相比具有更高的特异性。

 

Gene correction for SCID-X1 in long-term hematopoietic stem cells.(Nat Commun. 2019 Apr 26;10(1):2021. doi: 10.1038/s41467-019-10080-9. Cell used in: CD34+ cell,human)

 

Orthotopic replacement of T-cell receptor a- and ?-chains with preservation of near-physiological T-cell function.(Nat Biomed Eng. 2019 Jun 10. doi: 10.1038/s41551-019-0409-0. Cell used in: T cell,human)

 

Bacteria-free minicircle DNA system to generate integration-free CAR-T cells.(J Med Genet. 2019 Jan;56(1):10-17. doi: 10.1136/jmedgenet-2018-105405. Cell used in: K562,T cell,CD34+ cell,ES,human)

 

Single-Step, High-Efficiency CRISPR-Cas9 Genome Editing in Primary Human Disease-Derived Fibroblasts.(CRISPR J. 2019 Feb;2:31-40. doi: 10.1089/crispr.2018.0047. Cell used in: Fibroblast, CD4+ T cell,human)

 

Ribonucleoprotein Transfection for CRISPR/Cas9-Mediated Gene Knockout in Primary T Cells.(Curr Protoc Immunol. 2019 Feb;124(1):e69. doi: 10.1002/cpim.69. Cell used in: T cell,human and mouse)

 

2、使用LONZA 4D-Nucleofector LV单元

 

Generation and testing of clinical-grade exosomes for pancreatic cancer.(JCI Insight. 2018 Apr 19;3(8). pii: 99263. doi: 10.1172/jci.insight.99263. Cell used in:BM derived-MSC-derived exosomes)

 

CRISPR/Cas9-globin gene targeting in human haematopoietic stem cells.(Nature. 2016,539(7629): 384-389. Cell used in: CD34+ cell,human)

 

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