NEB三代测序解决方案

 
北京泽平代理美国进口New England Biolabs (NEB) 品牌三代测序建库试剂盒，用于Oxford Nanopore、Pacbio三代测序仪，提供包括高分子量DNA提取试剂盒、cDNA合成试剂盒/RNA反转录酶、Q5超高保真DNA聚合酶预混液等各类三代测序文库构建试剂盒。NEB文库制备试剂盒性能优越，质量稳定，为Oxford Nanopore Technologies 官方推荐产品。

NEB三代测序相关试剂产品丰富，满足人基因组 、微生物基因组 、扩增子、表观基因组、转录组的全方位测序需求。
 


 
一、样本提取

1、Monarch高分子量（HMW）DNA提取试剂盒，突破长读长测序应用的瓶颈。
·快速且简便的工作流程（细胞：30min，血液：60min，组织/细胞：90min），支持在同一天完成从样本到测序的全流程；  
·可以从细胞、血液、软器官组织和细菌中获得Mb级别的超高分子量DNA（UHMW DNA）；
·DNA片段大小可通过裂解过程中的搅拌速率进行调节。使用灵活，可以根据测序需求进行优化。


图. 从细胞样本中提取高分子量DNA只需30min。


 2、Monarch基因组DNA提取试剂盒
·分离出的DNA片段长度可超过50kb；
·高度完整的DNA片段，具有非常高的产量和纯度；
·对多种样本类型进行了应用验证。

 

 
二、微生物DNA富集

NEBNext微生物DNA富集试剂盒
·从污染的宿主DNA中高效富集微生物DNA，捕获的宿主DNA也可洗脱并保留；
·适合各种样本类型，无需活细胞。

 
 

三、全基因组扩增

phi29-XT RCA（循环扩增）试剂盒
·包含phi29-XT DNA 聚合酶，经基因工程改造，可在较短反应时间内获得高质量的产物，并提高热稳定性和灵敏度；
·扩增可从低至1fg的环状DNA起始；
·灵活的操作方案适用于不同类型的起始样本；
·支持多个下游应用，无需进一步处理步骤；
·试剂盒包含dNTPs和外切酶抗性的随机引物。


图. phi29-XT RCA（滚环扩增）试剂盒概览。phi29-XT RCA（滚环扩增）试剂盒是一种快速、使用简单、用途广泛的试剂盒。该试剂盒中包含使用随机引物混合物进行滚环扩增（RCA）所需的全部试剂。该试剂盒可从纯化的环状DNA或细菌细胞等多种起始样本获得高得率的DNA产物。该试剂盒应用广泛，可用于DNA测序、无细胞DNA富集、无细胞蛋白表达和DNA生物传感器。


图. phi29-XT RCA（滚环扩增）试剂盒可有效扩增低至1fg pUC19 DNA。没有模板（NTC）或使用1fg pUC19 质粒的条件下，使用phi29-XT RCA（滚环扩增）试剂盒在42℃下进行2h的RCA反应，平行重复反应四次，使用NEB AclI酶消化反应产物，该酶将特异性切割质粒序列以产生两个片段（373bp和2313bp），并使用琼脂糖凝胶电泳验证扩增成功性。phi29-XT DNA 聚合酶可在2h内高效扩增1fg的2.7kb环状质粒DNA。

 


四、cDNA合成&扩增

1、NEBNext单细胞/超低起始量cDNA合成&扩增模块
·从单个细胞或2pg~200ng的总RNA制备更高产量、更高质量的全长转录本测序文库；
·单管完成从细胞裂解到cDNA的全部实验流程，减少了操作步骤和手动操作时间。


2、Induro反转录酶
·反转录延伸能力强，可快速获得大量长片段cDNA；
·强大的抑制剂耐受能力，使cDNA合成更稳定；
·适用于RNA直接测序和长片段cDNA测序；
·热稳定性更强，高温条件下合成cDNA更稳定；
·与源自逆转录病毒的反转录酶保真度相当。


3、LunaScript反转录SuperMix试剂盒
·热稳定的Luna反转录酶，可在更高温度下合成cDNA，可用于困难模板；
·反应快速（<5min）；
·总RNA起始量从高达1μg到低至单拷贝RNA，均能得到稳定、线性和灵敏的检测结果。


4、ProtoScript II 反转录酶
·不同起始量的RNA均能高效反转录；
·提高热稳定性；
·合成至少10kb长度的cDNA。

 


五、扩增子测序

1、LongAmp热启动Taq 2X 预混液
·Taq和Deep Vent DNA 聚合酶优化组合；
·更高的保真度；
·更长的PCR产物。


2、Q5热启动超保真2X预混液
·超高保真性 ：约为Taq酶的280倍，提供非常优秀的扩增保真度；
·超强扩增能力：几乎无需优化，适用于各种模板，并满足高特异性和高产量需求；
·无惧高GC：普通DNA聚合酶难以扩增高GC或高AT的样品，Q5支持扩增更宽的模板范围；  
·PCR时间更短：扩增精确度高，且扩增速度快。Q5融合了Sso7d DNA 结合域，增强持续合成能力，并减少延伸时间，延伸速度可达10秒/kb。此外，基于核酸适配体的热启动方式，无需额外的高温激活步骤， 支持室温建立体系。  
·扩增产物长达20kb：Q5可高效扩增高达20kb的简单模板，或10kb的复杂模板 。  

 

 
六、甲基化建库

NEBNext甲基化建库酶学转化法模块
·酶学转化法可更大限度减少DNA损伤，避免重亚硫酸盐转化导致的DNA断裂、丢失和GC偏嗜；
·转化效率高，GC偏嗜性小，提供更优秀的5-mC和5-hmC检测灵敏性。

 

 

七、文库制备

NEBNext连接测序配套模块
Oxford Nanopore Technologies 推荐了众多NEBNext和NEB产品，以用于Oxford Nanopore 测序平台不同样本类型和不同应用的文库制备流程，新推荐的NEBNext连接测序配套模块（货号E7180）同时包含了以前推荐三个模块（NEBNext FFPE DNA 修复混合液、NEBNext Ultra II 未端修复/加dA尾模块、NEBNext快速连接模块），使用更加方便。同时该模块已为Oxford Nanopore Technologies 连接测序试剂盒（SQK-LSK109、SQK-LSK110和SQK-LSK114）的多个操作流程优化了体积，使连接酶量翻倍，没有多余的缓冲液或过量的试剂。

Oxford Nanopore Technologies 官方推荐网址
https://store.nanoporetech.net/native-barcoding-kit-96-v14.html
https://store.nanoporetech.net/multiplex-ligation-sequencing-kit-xl-v14.html
https://store.nanoporetech.net/ligation-sequencing-kit-v14.html

NEBNext连接测序配套模块组分体积比较

优势
·Oxford Nanopore Technologies 官方推荐配套文库制备产品；
·连接酶量翻倍，为Nanopore连接测序试剂盒（SQK-LSK109、SQK-LSK110和SQK-LSK114）进行了组分体积的优化；
·杜绝浪费，没有多余的缓冲液或过量的试剂；
·适用于所有Nanopore测序仪：MinION、GridION、PromethION、Floungle。

 

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