中文 ENGLISH
客服热线:4006860100/13521452266
首页 >> 资讯中心 >> 精品推荐

G-REX是美国Wilson Wolf Manufacturing 为T细胞免疫疗法研发的一款用于T细胞培养的装置,克服了目前T细胞免疫治疗大规模应用的障碍。G-REX培养瓶通过底透气膜使O2和CO2得到充分交换,一次性加入大量培养基可支持细胞培养长时间不换液,减少换液频率,减少操作,并且细胞培养过程中不需要摇晃,在普通的CO2培养箱中静止培养即可。目前已被证实在培养: CTL,TIL ,NK, Vg9Vd2 T cells ,调节性T细胞,病毒特异性T细胞。

 

目前,T细胞转导基因是细胞治疗流程的障碍之一。普遍的细胞转导步骤是将激活的T细胞在涂有RetroNectin的袋子或板上进行病毒转导,在这个过程中其中要先预处理涂有RetroNectin的袋子或板子,然后才能进行转导。转导后还要更换新的培养容器。这种方法虽然转导效率相对比较好,但步骤繁琐,花费时间长,而且不符合封闭操作。

 

G-REX培养瓶不能包被RetroNectin,所以导致细胞转导无法在G-REX瓶子中完成。

 

Vectofusin-1 (MiltenyiBiotec Inc., Auburn, CA, USA)是一种合成肽,当加入到病毒和细胞的溶液中时,可以增强病毒转导。Vectofusin-1形成a-螺旋状纳米纤维,与病毒颗粒结合增强病毒-细胞相互作用。

 

在这里,我们分享一种简单的方法,用于在悬浮液中转导T细胞,并且作者展示了新的转导步骤,集成到一个流线型的制造过程,而整个过程仅仅依赖于一个单一的G-Rex生物反应器。(Christine Gagliardi, Mariam Khall & Aaron E Foster, Streamlined production of genetically modified T cells with activation, transduction and expansion in closed-system G-Rex bioreactors,Cytotherapy,2019;21:1246-1257) 


首先,作者对传统的转导病毒培养模式和G-REX培养模式做了流程的对比

简化生产过程,G-REX瓶子中完成T细胞激活,转导,扩增,收获
 
基于培养袋和G-REX的流程

 

可以看出,用G-REX和Vectofusin-1,可以简化步骤,使得使细胞激活,转导,扩增,收获都在同一个G-REX瓶子中完成。
G-REX培养实验步骤如下:
在封闭系统G-REX100M-CS中
Day 0 :PBMC在40ML培养基中复苏,激活
Day 2:转导,将Vectofusin-1和病毒液加到G-REX100M-CS中
Day 3:培养基加到最大体积(1L)
之后每天取上清液,检测葡萄糖浓度和乳酸盐浓度。每三天添加一次细胞因子。
Day11:收获细胞(GatheRex)
作者对两种培养模式下的细胞数目做了对比,可以看到细胞数在第14天左右达到最大,而且在相同接种数下,培养袋和G-REX培养的细胞数目几乎没有差别。
细胞数对比:

简化生产过程,G-REX瓶子中完成T细胞激活,转导,扩增,收获

扩增倍数对比: 

简化生产过程,G-REX瓶子中完成T细胞激活,转导,扩增,收获
 
培养同样天数的情况下,需要操作的时间对比。
时间对比:

简化生产过程,G-REX瓶子中完成T细胞激活,转导,扩增,收获
 
可以明显看出G-REX培养在操作的时间上比传统操作节省75%的时间。

同时,也对整个实验流程所用到的实验耗材做了价格上的对比,可以看出用G-REX培养节省了38%的费用。
价格对比:
简化生产过程,G-REX瓶子中完成T细胞激活,转导,扩增,收获

当然,作者还对两种培养方式下,收获的T细胞的表型和功能进行分析,实验数据表面并无差异,详情见文章。
本篇文章介绍了在G-REX瓶子中完成T细胞激活、转导、扩增、收获等步骤,虽然转导效率比传统转导方式略低,但在操作时间,费用等方面节省很多,而且消除了细胞在激活和转导之间的清洗和转移,降低了操作步骤,减少了污染的风险。而且也附和我国颁布的《细胞治疗产品研究与评价技术指导原则(试行)》中,提出的细胞治疗研究者应不断优化制备工艺,减少物理、化学或生物学作用对细胞的特性产生非预期的影响,尽量达到自动化、全封闭的生产的标准。

 

更多G-Rex细胞培养瓶应用,欢迎来电咨询13521452266

——G-Rex中国独家代理商北京泽平

版权所有:北京泽平科技有限责任公司   地址:北京市海淀区花园北路44号贯通大厦B215室   电话:135-21452266

传真:010-82089737    E-mail:sales@bjzeping.com     京ICP备08010843号-2      网站建设首企互联