NEB DNA 聚合酶
——PCR、LAMP、RT-qPCR用DNA聚合酶、反转录酶


北京泽平代理美国进口NEB（New England Biolabs）公司的各类DNA聚合酶（DNA Polymerase）、反转录酶（逆转录酶，Reverse Transcriptase），用于PCR、等温扩增（环介导等温扩增LAMP）、链置换反应、qPCR（实时荧光定量PCR）、RT-qPCR（实时荧光定量逆转录PCR）等，进行以DNA、RNA为模板的DNA合成，供应Taq DNA 聚合酶、Q5超高保真DNA聚合酶、Bst DNA 聚合酶大片段、Bst 2.0 DNA 聚合酶、Vent DNA 聚合酶、phi29 DNA 聚合酶、RNA反转录酶等，提供单酶、热启动DNA聚合酶、Mix预混液、试剂盒、无甘油、GMP级别等多种形式，以及dNTP、缓冲液buffer等各类PCR、等温扩增试剂。
 



一、PCR用DNA聚合酶

1、OneTaq DNA 聚合酶 / OneTaq热启动DNA聚合酶——标准PCR

①NEB OneTaq DNA 聚合酶（OneTaq DNA Polymerase，货号M0480）是经过优化的Taq DNA 聚合酶与Deep Vent DNA 聚合酶的混合物，Deep Vent DNA 聚合酶的3'→5'核酸外切酶活性，提升了Taq DNA 聚合酶的保真性和聚合能力，其保真度比Taq DNA 聚合酶高2倍，适用于常规和复杂的PCR实验，如高AT或高GC的DNA模板。

 
②NEB OneTaq 热启动DNA聚合酶（OneTaq Hot Start DNA Polymerase，货号M0481）是OneTaq DNA 聚合酶额外添加了核酸适配体（aptamer）抑制剂，抑制剂能够与聚合酶发生可逆结合，当温度低于45℃时抑制聚合酶活性，而正常的PCR热循环条件下聚合酶被激活，可在室温下建立反应。OneTaq热启动DNA聚合酶无需额外的高温激活步骤，使用方便，同时减少了引物二聚体和副产物对反应的干扰。


OneTaq / OneTaq热启动DNA聚合酶提供聚合酶、预混液、试剂盒等多种形式。



 


2、Taq DNA 聚合酶 / Taq热启动DNA聚合酶——标准PCR

①NEB Taq DNA 聚合酶（Taq DNA Polymerase，货号M0320）是一种重组来源的热稳定DNA聚合酶，具有5'→3'聚合酶活性和5'结构特异性核酸内切酶活性，广泛应用于PCR中。随酶提供10×标准Taq反应缓冲液（无Mg2+、无变性剂）和MgCl2，可提供高反应产量。

 
②NEB Taq 热启动DNA聚合酶（Hot Start Taq DNA Polymerase，货号M0495）是Taq DNA 聚合酶和核酸适配体抑制剂的混合物，可与聚合酶可逆结合，在温度低于45℃时抑制聚合酶活性，在正常的PCR循环条件下释放酶，不需要单独的高温步骤激活酶，避免了非特异性扩增，并支持在室温下建立反应，非常适合IVD应用。

 
Taq / Taq热启动DNA聚合酶提供聚合酶、预混液、试剂盒等多种形式。
 


 

 
3、Q5超高保真DNA聚合酶 / Q5热启动超高保真DNA聚合酶——超高保真PCR

①NEB Q5 超高保真DNA聚合酶（Q5高保真聚合酶，Q5 High-Fidelity DNA Polymerase，货号M0491）是一种热稳定的高保真DNA聚合酶，具有3'→5'核酸外切酶活性，融合了具有增强持续延伸能力的Sso7d DNA 结构域，具有非常高的保真度、延伸速度、稳定性，错配率不到Taq DNA 聚合酶的1/280，是克隆的理想选择，可用于长片段、难扩增片段。随酶提供经优化的缓冲液系统，不论GC含量多少，都可以进行高效扩增（当GC含量≥65%，加入5× Q5 High GC Enhancer 可增强扩增性能）。




NEB高保真DNA聚合酶三重检查点实现正确复制

·正确底物偏好：优先选择正确的dNTP，而不是错误的;
·错配减慢延伸：当错误的dNTP结合在聚合酶活性位点上，掺入过程会减慢直至停止，增加错配碱基解离机会；
·错配外切酶活性：掺入错误碱基引起的微小差异，将导致合成链的3'转移到外切酶活性结构域，以切除错配核苷酸，然后合成链移回Q5聚合酶结构域，继续进行正确dNTP掺入。




NEB Q5 高保真DNA聚合酶优势

·超高保真性——保真度约为Taq DNA 聚合酶的280倍，错配率非常低；
·超强适应性——适应高AT、高GC含量DNA模板；
·超快速——具备非常快的合成速度，延伸速度可达10秒/KB；
·扩增产物长——简单模板可扩增20kb，复杂模板可扩增10kb；
·丰富类型——提供单酶、预混液、试剂盒、热启动酶、耐U酶等多种产品类型。



图. 使用Q5超高保真DNA聚合酶扩增从低到高不同GC含量的人基因组DNA。所有反应均为30个循环，并通过LabChip微流控分析技术观察结果。

 
②NEB Q5 热启动超高保真DNA聚合酶（Q5热启动高保真聚合酶，Q5 Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase，货号M0493）在Q5超高保真DNA聚合酶的基础上，额外加入核酸适配体抑制剂，可在室温条件下建立反应体系。


③NEB Q5U 热启动超高保真DNA聚合酶（Q5U Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase，货号M0515）是Q5超高保真DNA聚合酶的改造版，在尿嘧啶结合域中含有突变，能够读取和扩增含有尿嘧啶和次黄嘌呤的模板，可用于扩增重亚硫酸氢盐转化、脱氨基、受损DNA（如 FFPE），可与dUTP和UDG联合使用，防止PCR交叉污染，并提高USER克隆的组装效率和准确性。Q5U作为一种热启动DNA聚合酶，含有在室温下抑制聚合酶活性的适配体，可在经典PCR条件下达到更佳扩增。



 

 
4、Vent DNA 聚合酶 / Deep Vent DNA 聚合酶——超高热稳定性，用于复杂模板

①NEB Vent DNA 聚合酶（Vent DNA Polymerase，货号M0254）是一种重组高保真耐热DNA聚合酶，具有3'→5'核酸外切酶校读活性，保真度比Taq DNA 聚合酶高5~15 倍。在95℃下温育1小时后，仍保留90%以上的聚合酶活性，在95℃下半衰期为6.7小时，具备非常高的热稳定性，非常适合高GC模板、环状序列。

 
②NEB Deep Vent DNA 聚合酶（Deep Vent DNA Polymerase，货号M0258）是一种高保真耐热DNA聚合酶，具有3'→5'核酸外切酶校读活性，保真度比Taq DNA 聚合酶高5倍，具备非常高的热稳定性，在95°C时半衰期为23小时，在95℃~100℃的范围内，Deep Vent DNA 聚合酶比Vent DNA 聚合酶的稳定性更好，非常适合高GC模板、环状序列。

 

 
5、LongAmp Taq DNA 聚合酶  / LongAmp热启动Taq DNA 聚合酶——30kb长片段扩增

①NEB LongAmp Taq DNA 聚合酶（LongAmp Taq DNA Polymerase，货号M0323）是Taq DNA聚合酶和Deep Vent DNA 聚合酶的混合物。Deep Vent DNA 聚合酶的3'→5'核酸外切酶活性提高了Taq DNA 聚合酶的保真度和扩增性能，LongAmp Taq DNA 聚合酶的保真度是Taq DNA 聚合酶的2倍，可在75℃下扩增长达30kb的Lambda DNA 或人基因组DNA。


图. 使用LongAmp Taq DNA 聚合酶扩增特定序列的人基因组DNA。扩增片段长度标注在胶图下方。Marker (M) 为NEB 1kb DNA Ladder。


②LongAmp热启动Taq DNA 聚合酶（LongAmp Hot Start Taq DNA Polymerase，货号M0534）是在LongAmp Taq DNA 聚合酶基础上，额外添加了核酸适配体抑制剂，在低于45℃时结合聚合酶抑制其活性，在正常PCR循环条件下释放酶，无需单独的高温激活步骤，可在室温下建立PCR反应体系。
 

图. 以不同起始量的人类基因组DNA为模板，使用LongAmp热启动Taq DNA 聚合酶扩增6kb片段。起始模板量标注在电泳胶下方。Marker(M) 是 NEB 1kb Plus DNA Ladder。


LongAmp Taq / LongAmp 热启动Taq DNA 聚合酶提供聚合酶、预混液等形式。
 


 

 
6、Hemo KlenTaq 血源直扩

NEB Hemo KlenTaq 血源直扩（货号M0332）无需提取和纯化DNA，可直接从全血样品中进行PCR。Hemo KlenTaq是截短后的Taq DNA 聚合酶，缺少前280个氨基酸，其含有的一些突变，能够耐受全血中的抑制剂（25µl反应体系能耐受20%的全血，50µl体系能耐受30%的全血），直接扩增人和小鼠全血样品中的DNA，实现低初始样本量的扩增，适用于全血PCR、干血点PCR。


图. 用Hemo KlenTaq 扩增人类全血样本。图例中标明了样品中血液的百分比和使用的抗凝剂。Marker (M) 为1kb Plus DNA Ladder。

 

 
NEB PCR用DNA聚合酶选择
 

二、等温扩增用DNA聚合酶

1、Bst DNA 聚合酶——快速、高产量、耐盐、高热稳定性

①NEB Bst DNA 聚合酶全长（Bst DNA Polymerase, Full Length，货号M0328）是一种全长聚合酶，具有5'→3'聚合酶和双链特异性5'→3'核酸外切酶活性，但缺乏3'→5'核酸外切酶活性，用于65℃条件下以DNA为模板的等温扩增。

 
②NEB Bst DNA 聚合酶大片段（Bst大片段聚合酶，Bst DNA Polymerase, Large Fragment，货号M0275）是重组Bst DNA 聚合酶蛋白的部分片段，具有5'→3'聚合酶活性，但缺失5'→3'核酸外切酶活性，用于环介导等温扩增（LAMP）、高GC区DNA测序、纳量级DNA模板快速测序。

 
③NEB Bst 2.0 DNA 聚合酶（Bst 2.0 DNA Polymerase，货号M0537）是Bst DNA 聚合酶大片段的同源物，由电脑模拟设计完成，对环介导等温扩增LAMP性能进行了优化，具有5'→3'DNA聚合酶活性和强链置换活性，但缺失5'→3'核酸外切酶活性，与野生型Bst DNA 聚合酶大片段相比，大幅提高了扩增速度、产量、耐盐性和热稳定性。提供WarmStart温启动DNA聚合酶，可在室温条件下建立反应体系，提高反应效率。另提供无甘油剂型。


图. LAMP耐盐性提高。使用Bst 2.0 进行LAMP反应时，盐量的增加表明其对抑制剂的耐受力增强。当野生型Bst DNA 聚合酶大片段被完全抑制时，Bst 2.0 仍可保持较高活性。

 

图. 快速LAMP检测。在LAMP实验中扩增不同靶标，结果表明，使用Bst 2.0 可以比Bst大片段更快达到扩增阈值。



 

 
2、phi29 DNA 聚合酶——超强持续合成能力

NEB phi29 DNA 聚合酶（phi29 DNA Polymerase，货号M0269）是从噬菌体phi29（Φ29）中克隆的高保真DNA聚合酶，具有优秀的链置换能力、超强的持续合成能力，支持生成大片段，具备3'→5'核酸外切酶校读活性，高保真性，用于30℃条件下以DNA为模板的等温扩增，非常适合多重置换扩增。另提供GMP级别试剂。

 

 
3、DNA聚合酶I大片段（Klenow片段）——cDNA第二链合成

NEB Klenow DNA 聚合酶I大片段（Klenow片段，DNA Polymerase I, Large (Klenow) Fragment，货号M0210）是大肠杆菌DNA聚合酶I的蛋白水解产物，保留了全酶的聚合酶活性和3'→5'核酸外切酶活性，缺失5'→3'核酸外切酶活性。适用于37℃下进行cDNA第二链合成、突变方案中的第二链合成。



 

 
4、Protoscript II 反转录酶——超低RNase H 活性，长片段合成，cDNA第一链合成

NEB Protoscript II 反转录酶（ProtoScript II Reverse Transcriptase，货号M0368）是一种重组M-MuLV反转录酶（逆转录酶），具有非常低的RNase H 活性，避免长RNA模板过早降解，增强的热稳定性，可在比野生型M-MuLV 更高的温度下（48°C）合成cDNA第一链。Protoscript II 反转录酶提供更高的特异性、更高的cDNA产量、长达12kb的全长cDNA产物。此外提供ProtoScript II cDNA 第一链合成试剂盒。


图. 使用递减量的Jurkat总RNA（1μg~1pg）和200units的NEB ProtoScript II 逆转录酶合成cDNA第一链（20μl体系），反应物在42°C下孵育50分钟，然后在80°C下热灭活5分钟。使用LongAmp Taq 预混液将1μl cDNA 用于25μl体系PCR中，进行40个循环。靶标是GAPDH的0.6kb片段。Marker是NEB 2-Log DNA Ladder。



图. 即使较长的模板，也能稳定合成cDNA。使用200units NEB ProtoScript II 逆转录酶合成（20μl体系）Jurkat总RNA（1μg）的cDNA第一链。反应物在42°C下孵育50分钟，然后80°C下热灭活5分钟。使用NEB LongAmp Taq 预混液将1μl cDNA 用于25μl PCR 中，进行35~40个循环。大小如凝胶上方所示。 

 

 
5、Induro反转录酶——超强持续合成，强抑制剂耐受，强热稳定性，复杂片段、长片段合成

NEB Induro反转录酶（Induro Reverse Transcriptase，货号M0681）是由II型内含子编码的反转录酶，在RNA反转录合成cDNA过程中，展示出更强的持续合成能力，可快速获得大量长片段cDNA；热稳定性强，高温条件下合成cDNA更稳定；强大的抑制剂耐受能力，使cDNA合成更稳定。Induro反转录酶特别适合长转录本、复杂二级结构，以及含有抑制成分的RNA样品。Induro反转录酶提升了长转录本的5'端测序覆盖度，适用于RNA-seq，如RNA直接测序、长读长cDNA测序。


图. Induro反转录酶的持续合成能力强，能够快速高效合成cDNA。Induro反转录酶能够在55℃条件下，5分钟内合成12kb cDNA 全长产物。以体外转录获得的不同长度的poly(A) RNA 作为模板（1kb、4kb、8kb、12kb），验证全长cDNA反转录效果。首先合成cDNA第一链，随后用NaOH水解RNA链，将cDNA产物等分，分别加入5'特异性引物合成全长双链cDNA。最后，在琼脂糖凝胶上加入等体积的双链cDNA产物进行检测。

 

图. Induro反转录酶热稳定性强大，能够在更高反应温度下稳定合成。Induro反转录酶能够在45℃~60℃条件下，10分钟内合成12kb cDNA 全长产物。以体外转录获得的不同长度的poly(A) RNA 作为模板（1kb、4kb、8kb、12kb），验证全长cDNA的合成效果。首先合成cDNA第一链，随后用NaOH水解RNA链，将cDNA产物等分，分别加入5'特异性引物合成全长双链cDNA。最后，在琼脂糖凝胶上加入等体积的双链cDNA产物进行检测。

 


6、WarmStart RTx 反转录酶——LAMP

NEB WarmStart RTx 反转录酶（WarmStart RTx Reverse Transcriptase，货号M0380）是一种由计算机设计的以RNA为模板的DNA聚合酶，具有完整的RNase H 活性，可使用RNA（cDNA合成）或单链DNA作为模板，通过引物合成互补的DNA链，专业用于扩增反应中RNA检测，特别适合环介导等温扩增LAMP。添加的可逆结合的适配体，可在40°C以下抑制反转录酶活性，实现室温构建，提高结果一致性和特异性。另提供无甘油、冻干形式，用于微流控设备，实现自动化工作流程。


图. 提高RT-LAMP的速度和灵敏度。将Bst 2.0 WarmStart DNA 聚合酶和WarmStart RTx 反转录酶在65°C下与1pg~100ng Jurkat 总RNA一起孵育。用实时荧光监测反应，所得曲线显示在左边，相应的阈值时间显示在右边。WarmStart RTx 提供更短的反应阈值时间，能以较低的RNA起始量，获得更高一致性和灵敏度。而使用AMV逆转录酶进行的RT-LAMP反应结果不一致，如较低RNA起始浓度下发生巨大变化（蓝色曲线）。


此外，NEB还提供含有RNA反转录酶的LunaScript反转录预混液试剂盒（含Luna反转录酶）等产品。

 

 

 

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