Lonza (Amaxa) 4D-Nucleofector LV 大规模流式电穿孔细胞核转染系统

——用于悬浮/贴壁哺乳动物真核细胞的大容量核酸转染仪

 

Lonza 4D-Nucleofector LV 大规模流式电穿孔细胞核转染系统（4D-Nucleofector LV Unit，简称LV模块，或LV单元），是在传统电穿孔技术的基础上，针对每一种细胞，优化电脉冲参数、转染液，使细胞转染效率、细胞活率得到显著提升，解决了原代细胞、干细胞、T细胞等使用传统电穿孔转染效率低下的问题。

4D-Nucleofector核转技术（原德国Amaxa Nucleofection核转染技术）对质粒DNA转染效率高达90％，寡核苷酸（如siRNA）转染效率高达99％，面世20年来，已成功转染＞1200种细胞系、＞130种原代细胞，并在干细胞、免疫细胞、神经细胞等各类较难转染的细胞、以及外泌体电穿孔载药获得了优秀的转染效果。

同时，4D-Nucleofector核转染可让外源基因直接穿过核膜进入细胞核，不依赖细胞有丝，实现2小时快速表达。Lonza 4D-Nucleofector LV模块可提供单次最高2×10^9个细胞、封闭、无菌的高效转染，在人T细胞、CHO悬浮细胞、HEK23悬浮细胞、K562细胞等超过700种细胞中大量应用。

Lonza全球共享数据库，包含超过1500种原代细胞、细胞系的转染数据，提供包括细胞来源、传代、培养条件、培养基、到转染后培养技巧的成熟流程，让研究者在海量数据支持中快速开展实验，并取得成功。操作4D-Nucleofector核转染设备时，只需一键调用Lonza内置的转染程序，即可实现细胞快速、高效转染，而无需自行摸索转染条件。



 

4D-Nucleofector核转染技术优势

-采用高分子聚合物电极，避免传统铝电极的离子毒害，维持细胞生理状态，提高存活率。
-转染后可快速观察实验结果，例如转染GFP后最快2小时可观察到蛋白。
-无需自己优化条件，拥有超过759种细胞类型的现成程序，可直接使用，全球共享数据库，超过1500条转染数据可供参考。
-可转染包括DNA、mRNA、miRNA、siRNA、肽、蛋白质、小分子化合物在内的多种底物。
-可用于难以转染的原代细胞、干细胞、神经元、细胞系，以及外泌体
-灵活的转染规模缩放，可在低、中、高通量中轻松转移，实现2×10^4至1×10^9个细胞数量的轻松扩展。
-全球发表文章超过14,000篇。

 

 


Lonza 4D-Nucleofector LV大规模细胞核转染仪，细胞治疗基础研究高效电转染系统


1、封闭、无菌的系统和耗材设计，满足细胞治疗基础研究的需求。


 

 

 

2、20mL大容量，LV核转仪提供单次1mL（最多1×10^8个细胞）的手动加样、20×1mL（最多2×10^9个细胞）的自动加样，快速高效。


 

 

 

3、符合cGMP要求，可使用符合美国FDA21 CFR part 11、欧盟Annex 11的软件进行控制，适用于严格监管的GMP实验室。

①用户管理（登陆，不同级别）
②具有用户姓名与时间标记的电子签名
③任何记录的修改或是数据的创建均被记录在案
④结果报告：失败报告，以及详细的问题描述
⑤可根据21CFR part11的要求导出数据（加密，预防）
⑥审计追踪（使用记录、更改记录）
⑦无数据删除可能

 

 

 

4、规模可简单放大，在4D-Nucleofector X模块（4D-Nucleofector X Unit，简称X模块，或X单元）上进行的2×10^4细胞数量的优化转染方案，可直接在LV模块上使用。


 

 

实验数据：分别用4D-Nucleofector细胞核转仪X模块（100μL）、LV模块（1mL）向包括人T细胞、PBMC、293细胞、CHO细胞在内多种代表性细胞中转染pmaxGFP载体，实现转染规模的线性放大。




 

 

 

Lonza 4D-Nucleofector LV大规模流式核转染系统，基因治疗研究的不二工具。

1、作为非病毒转染技术，适用于不同的基因编辑系统，如锌指核酸酶(ZFN)、转录激活因子样效应物核酸酶（TALEN）、CRISPR/Cas9基因编辑系统。
2、可转染多种不同的底物，如DNA、mRNA、蛋白（如Cas9 RNP），由于转染条件相同，可进行不同底物的简单共转染。
3、常用于应用iPS、CD34+造血干细胞、T细胞的稳定修饰。
4、技术成熟可靠，有≥80本相关出版物刊载，众多领域的知名学者正在使用4D-Nucleofector技术，全球发表文章超过14,000篇，并持续不断增加中！

Lonza 4D-Nucleofector大规模流式核转染系统，作为转染人原代T细胞的强大方法，与CRISPR和其他基因编辑技术的联合应用，已成为基因治疗基础研究的理想工具。

 



 

4D-Nucleofector LV核转仪参数

注：常用模块组合参考：C+X+LV，X模块用于小规模优化转染条件，LV模块用于大规模转染。

 

 


 

参考文献

1.Closed-system transposon-mediated manufacture of GMP grade CAR T-cells via the Lonza Nucleofector LV XL.  LM Brownrigg,et al. ELSERIER(2020)
2.Biomimetic mineralized collagen scaffolds and their effect on osteogenic differentiation. L Luo,et al. ELSERIER(2020)
3.Optimization of clarification process for viral vectors. B Raghavan,et al. ELSERIER(2020)
4.Generation and testing of clinical-grade exosomes for pancreatic cancer. Mayela Mendt,et al. JCI Insight(2018)
5.Off the shelf T cell therapies for hematologic malignancies. BJ McCreedy,et al. ELSERIER(2018)
6.Unlocking the Potential of CRISPR-Based Gene Editing. Andrea Toell. Genetic Engineering & Biotechnology News(2017)


 

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