Cyitva Ficoll人淋巴细胞分离液、Percoll细胞分离液
——密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞PBMC/大鼠兔子细胞/细胞器/病毒


北京泽平代理瑞典进口思拓凡Cytiva（原GE Healthcare Life Sciences，GE）Ficoll淋巴细胞分离液（Ficoll分层液）、Percoll淋巴细胞分离液（即Percoll分层液、Percoll密度梯度离心介质、分离介质），包括Ficoll-Paque PLUS、Ficoll-Paque PREMIUM、Ficoll PM400、Percoll、Percoll Plus等全系列密度梯度分离液和干粉原料。

其中Ficoll系列淋巴细胞分离液为即用型分离液，提供生命科学实验室基础研究级别、GMP级别人淋巴细胞分离液，提供100mL、500mL等多种规格；Percoll系列淋巴细胞分离液，通过调整浓度可配置不同密度分离液，分别用于提取纯化人、小鼠、大鼠、兔子等各类动物细胞（例如血液、骨髓、脾脏、肝脏、肺、肠道、脑组织的淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞等免疫细胞/白细胞、人外周血单个核细胞PBMC、中性粒细胞、原代肝脏细胞、小胶质细胞、星形胶质细胞、肠上皮细胞、肿瘤细胞、TIL肿瘤浸润淋巴细胞），以及植物细胞、细菌、真菌、病毒等，覆盖细胞、细胞器（如线粒体）、细胞亚颗粒、病毒的提取纯化。

北京泽平作为思拓凡Cytiva生命科学产品线一级代理商（原GE Healthcare Life Sciences，GE医疗生命科学部），大量批发、直销Cytiva品牌各类微滤、超滤、蛋白纯化、细胞培养产品，包括Ficoll/Percoll淋巴细胞分离液、ÄKTA层析柱和填料、Biacore芯片和试剂盒、原颇尔Pall针头过滤器、囊式过滤器、过滤膜、超滤离心管、TFF切向流超滤系统、深层过滤器、完整性测试仪、生物反应器、原GE中空纤维柱、Whatman IVD膜材、Hyclone胎牛血清和细胞培养基、双抗、Amersham PVDF转印膜和NC膜、Sera-Mag磁珠等实验室和生物制药试剂、耗材、仪器。北京泽平凭借专业的售前、售后服务，多年来在各大高校、科研院所、生产企业中赢得了良好的口碑。

①Cytiva官方授权，完整进口手续，正品保证
②专业技术支持团队，中文咨询服务，解决实验问题
③仪器现场演示Demo、培训
④完善销售流程，售前、售后服务
⑤一级代理商，优势价格，热销品现货销售
 

 

一、Cyitva（原GE）Ficoll人淋巴细胞分离液



Cytiva（原GE）Ficoll淋巴细胞分离液利用密度梯度离心法原理，大量用于从骨髓、血液（外周血、脐带血）中分离提取白细胞中的淋巴细胞、单核细胞、人外周血单个核细胞PBMC，即白膜层，或提取白细胞中的中性粒细胞，去除红细胞、血小板等。Cytiva（GE）Ficoll淋巴细胞分离液上市50余年，拥有海量的文献支持。

Cytiva（GE）Ficoll淋巴细胞分离液由多聚蔗糖Ficoll PM400（分子量为400,000的高分子量蔗糖与表氯醇的聚合物）、泛影酸钠、EDTA二钠钙组成。Ficoll分离液为即用型无菌溶液，提供1.077g/mL、1.073g/mL、1.084g/mL固定密度，适用于人、小鼠、大鼠的血液和骨髓样本。



  


Cytiva（GE）Ficoll淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离细胞原理

在梯度介质中，样品中不同颗粒密度不同，因此在一定离心力下，不同密度颗粒可沉降至特定位置，从而进行分离。

·沉降速率与颗粒大小成正比；
·沉降速率与颗粒和周围介质的密度差成正比；
·当颗粒密度与周围介质的密度相等时，沉降速率为0；
·随着介质粘度的增加，沉降速率降低；
·随着离心力的增加，沉降速率随之增加。



 


Cytiva（GE）Ficoll-Paque PLUS/Ficoll-Paque PREMIUM 淋巴细胞分离液优势

·高活性：高效分离人淋巴细胞，细胞活率＞90%，保持B淋巴细胞、T淋巴细胞的活力。

·高回收率：回收产物中单个核细胞占比达95%±5%，其中原始血样中的淋巴细胞回收率为60%±20%，粒细胞3%±2%、红细胞5%±2%、血小板总数<0.5%。

·低内毒素：内毒素水平低，<0.12EU/mL，并进行了测试。

·GMP级别：Ficoll-Paque PREMIUM 淋巴细胞分离液生产符合ISO13485质量管理认证，满足美国药典章节<1043>相关规定，细胞毒性等级为0级，可提供监管支持文件（RSF文件）。

·使用方便：即开即用，已灭菌。

·选择多样：提供3种不同密度，适配不同样本，其中1.077g/mL适合常规单个核细胞分离，1.073g/mL适合分离低密度人单个核细胞、间充质干细胞MSC，1.084g/mL适合分离高密度人单个核细胞、小鼠或大鼠淋巴细胞。

·结果可靠，文献丰富：Ficoll细胞分离液上市＞50年，技术成熟，结果可靠，可提供海量文献参考，技术支持强大，助力实验快速推进。
 

 
 
Cytiva（GE）Ficoll分离液分离细胞步骤

1、用Ficoll从血液分离单个核细胞步骤

①样本准备
a. 在10mL离心管中加入2mL抗凝血、2mL平衡盐溶液；
b. 将血液与平衡盐溶液颠倒混匀，或用移液枪吹打混匀。

②分离单个核细胞
a. 将Ficoll细胞分离液充分混匀；
b. 取一支离心管，加入3mL Ficoll-Paque溶液；
c. 小心地在Ficoll溶液上加入稀释的4mL血液样品；
d. 18~20℃条件下，400×g离心30~40min（离心机brake功能须关闭）；
e. 吸除上层血浆及血小板层；
f. 小心吸出单个核细胞层，并放置在另一个离心管中。

③清洗分离的细胞
a. 在含有单个核细胞层的离心管中加入3倍平衡盐溶液（6mL）；
b. 用移液器缓慢吹打混匀细胞；
c. 18~20℃条件下，400~500×g离心10~15min；
d. 去除上清液，在6~8mL平衡盐溶液中重悬细胞；
e. 18~20℃条件下，400~500×g离心10min；
f. 去除上清液，并在合适的溶液中重悬细胞。
 

2、用Ficoll从血液分离粒细胞步骤

①样本准备
与用Ficoll从血液分离单个核细胞相同。

②分离粒细胞
a. 按Ficoll分离单个核细胞步骤，将单个核细胞层吸除；
b. 将Ficoll溶液层吸除，留下层的粒细胞层和红细胞层；
c. 收集白色的粒细胞层，并转移到一个新的离心管中；
d. 用至少5倍体积的平衡盐溶液重悬细胞，400×g离心15min；
e. 用红细胞裂解液裂解粒细胞中可能残留的红细胞；
f. 18~20℃条件下，400~500×g离心10~15min；
g. 去除上清液。

③清洗分离的细胞
a. 在6~8mL平衡盐溶液中重悬粒细胞；
b. 18~20℃条件下，400~500×g离心10~15min；
c. 去除上清液，并在合适的溶液中重悬细胞。

 
3、用Ficoll分离大体积血液样本步骤

【方法一】
与用Ficoll从血液分离单个核细胞步骤相同，增加管子直径，保持同样的Ficoll页面高度（2.4cm）和血液样品页面高度（3.0cm），分离时间相同。增加血液样品高度可能会增加红细胞污染，增加管子直径不会影响分离时间。

【方法二】
①用PBS（pH7.2，2mM EDTA）2~4倍稀释样品；
②取50mL离心管，加入15mL Ficoll，然后在上面小心加入35mL稀释样品；
③20℃条件下，400×g离心30~40min；
④小心吸除上层，并将单个核细胞层转移到一个新的50mL管中；
⑤在管中加入PBS，混合后，20°C条件下300×g离心10min，然后小心去除上清液；
⑥如需去除血小板，用50mL PBS中重悬细胞，20°C条件下200×g离心10~15min；
⑦重复步骤⑥。

 
4、用Ficoll从骨髓中分离单个核细胞步骤

①将人骨髓与PBS（pH7.2，2mM EDTA）以6:1的比例混合（例如30mL骨髓加入5mL PBS）；
②用100μm滤器过滤混合液；
③取50mL离心管，加入15mL Ficoll，然后在上面小心加入35mL稀释样品；
④20℃条件下，445×g离心35min；
⑤小心吸除上层溶液，并将单个核细胞层转移到一个新的50mL管中；
⑥在管中加入PBS至40mL，混合后，20℃条件下300×g离心10min，小心去除上清液；
⑦如需去除血小板，用50mL PBS中重悬细胞，20℃条件下200×g离心10~15min；
⑧重悬细胞用于下游实验。

 
5、用Ficoll从骨髓中分离骨髓间充质干细胞MSC步骤

①将人骨髓与PBS（pH7.2，2mM EDTA）以1:1的比例混合（例如8mL骨髓加入8mL PBS）；
②在15mL离心管中，加入3mL Ficoll（1.073g/mL），在上面小心加入4mL稀释样品；
③20℃条件下，450×g离心30min；
④小心吸除上层，将单个核细胞层转移到一个新的50mL管中；
⑤在管中加入PBS至40mL，混合后，20℃条件下300×g离心10min，小心去除上清液；
⑥重悬细胞用于下游实验。

 


Cytiva（GE）Ficoll分离液使用注意事项

1、温度
必须为18~20℃。

2、样本
①血液样品必须新鲜，采集后24h内使用；
②通常需将样本进行1:1稀释。

3、操作
①使用水平转子离心机，关闭制动功能；
②将稀释后的血液小心地添加在Ficoll分离液上面，不要让血液冲破Ficoll分离液的液面，尽量平稳。

 

 
FAQ

1、Ficoll分离后得到的淋巴细胞中有较多红细胞污染？

①温度太低，Ficoll-Paque是一种密度梯度离心介质，在低温条件下，Ficoll-Paque本身的密度较高，红细胞的聚集效果较差，红细胞和粒细胞不能很好地穿透Ficoll-Paque层而造成污染。合适的分离温度应保持在18~20℃。

②离心速度不够或离心时间过短，必须达到足够的离心时间及离心力，不同细胞才能实现合适的分层。

2、Ficoll分离提取单个核细胞的得率较低，且活性较差？

温度过高，在温度较高的情况下，Ficoll-Paque产品的密度较低，某些淋巴细胞可穿透Ficoll-Paque层，细胞的活性也同时受到影响。合适的分离温度应保持在18~20℃。

3、Ficoll分离提取单个核细胞的得率较低，但活性正常？

血液样品与平衡盐溶液未按照1:1稀释，样品中红细胞压积较高，大量淋巴细胞被阻截在红细胞聚集区内。建议对样品进行适当稀释。

4、Ficoll分离提取单个核细胞的得率较低，且带有粒细胞污染？

离心机不稳定，导致密度梯度的波动，使单个核细胞层的条带变宽，与底层细胞混合。建议检查离心机是否配平，并检查离心机状态。

5、Ficoll分离提取单个核细胞得率较低，活性较差，且存在其他细胞污染？

可能存在其他人类血液样品、陈旧血液样品、非人类血液样品、非外周血样品等污染。建议采用Cytiva Percoll PLUS 细胞分离液，分离效果可能更好。

 
 

 

 
 


二、Cytiva（原GE）Percoll/Percoll Plus 淋巴细胞分离液



Cytiva（原GE）Percoll/Percoll Plus 细胞分离液参考文献丰富，自1977年上市以来，广泛用于生命科学实验室基础研究中各类细胞、细胞亚结构、病毒的提取纯化。Percoll成分为聚乙烯吡咯烷酮（PVP）涂层二氧化硅胶体，Percoll Plus成分为硅烷共价包覆二氧化硅颗粒，通过将Percoll/Percoll Plus原液配置为不同密度分离液，可进行不连续密度梯度离心（非连续性密度梯度离心）、连续密度梯度离心，具有比Cytiva Ficoll淋巴细胞分离液更广阔的应用范围。
 

 

 

Cytiva（GE）Percoll/Percoll Plus 溶液密度梯度法分离细胞原理

在梯度介质中，样品中不同颗粒密度不同，因此在一定离心力下，不同密度颗粒可沉降至特定位置，从而进行分离。

·沉降速率与颗粒大小成正比；
·沉降速率与颗粒和周围介质的密度差成正比；
·当颗粒密度与周围介质的密度相等时，沉降速率为0；
·随着介质粘度的增加，沉降速率降低；
·随着离心力的增加，沉降速率随之增加。



 

 
Cytiva（GE）Percoll/Percoll Plus 细胞分离液优势

1、应用广泛：可实现1.0~1.3g/mL范围内的密度梯度离心分离，适用于大多数密度在1.0~1.2g/mL的细胞、亚细胞颗粒、细胞器、低至70S的病毒。

2、使用灵活：可预先形成梯度，或通过角转子以中速离心自发产生梯度，进行非连续性密度梯度离心、连续密度梯度离心。

3、快速分离：粘度低，用预先形成梯度可在几分钟内用较低离心力（200×g~ 1000×g）快速完成细胞分离。

4、无菌，可重复灭菌：未稀释的Percoll原液、Percoll Plus原液和稀释液，均可用120℃ 30min重复高压灭菌。

5、无细胞毒性：成分为聚乙烯吡咯烷酮（PVP）涂层二氧化硅胶体（Percoll）、或硅烷共价包覆二氧化硅颗粒（Percoll Plus），呈化学惰性，不会渗透生物膜，不会粘附在膜上。

6、生理pH、等渗：低渗透压，很容易用生理盐水、平衡盐溶液或细胞培养基调整为生理离子强度和pH，在全部梯度中及梯度形成过程中实现等渗。

7、保持活力、形态：操作条件温和，保持细胞、细胞器、病毒的活性和膜完整性。

8、兼容下游实验：容易去除，和生物材料兼容，不影响被分离样本的进一步研究。

9、pH范围广：可在pH5.5~pH10的溶液内使用。如低于pH5.5、或二价阳离子存在，将发生凝胶作用，升温会加剧凝胶产生。

10、稳定性高：未开封可室温保存5年，-20°C下保存6个月。-20°C储存后，融化时会形成梯度，使用前必须将瓶子混合。预先形成的梯度如果未冻结，可存储数周，梯度形状不改变。

11、结果可靠，文献丰富：Percoll细胞分离液于1977年上市，技术成熟，结果可靠，可提供海量文献参考，技术支持强大，助力实验快速推进。

 
 
Cytiva（GE）Percoll/Percoll Plus 不同浓度配制方法（原液稀释方法）

1、常规方法（两步法）
①配置SIP储存液：1份1.5M NaCl或2.5M蔗糖加入到9份Percoll/Percoll Plus 原液中，得到SIP溶液。
②稀释：用0.15M NaCl或0.25M蔗糖溶液，将SIP溶液稀释到所需浓度。

2、Percoll计算器（一步法）
 


通过Cytiva在线工具（https://www.cytivalifesciences.com.cn/zh/cn/support/online-tools/cell-preparation/percoll-calculator），自动计算溶液配比。

 

 
Cytiva（GE）Percoll/Percoll Plus 梯度离心法操作步骤

1、连续密度梯度离心（预制梯度，离心自动形成梯度）
①将储存液稀释为需要最大分辨率范围中间的一个密度。
②在角转头上30,000×g离心15min形成梯度。
③形成梯度后，细胞等密度区带能够通过400×g低速离心15~20min完成。

2、不连续密度梯度离心
①将不同密度的Percoll稀释液层层叠加，缓慢加入，密度大的位于下层。
②离心条件相对温和。
 


3、原位形成梯度
多用于分离亚细胞颗粒和病毒。
①用蔗糖制备SIP储存液，并用0.25M蔗糖溶液将SIP溶液稀释为所需要的密度。
②将样品与梯度材料混合。
③用角转头离心。


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