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义翘神州CRO,蛋白表达、抗体制备、生物分析一站式服务,超过10年的全球药企定制化技术服务经验,完成总项目超过16,000个,曾用12天完成了从基因合成到百毫克真核蛋白表达的研发和生产,成功率>95%。

一、分子生物学服务
1、实时定量PCR分析服务

服务内容 周期 交付内容
SYBR Green dye法 1-2周 ·分析报告
·剩余引物
·引物设计与合成
·qPCR检测
·数据分析
TaqMan探针法 3-5周 ·分析报告
·剩余引物及探针
·引物设计、合成与优化
·探针设计与合成
·qPCR检测
·数据分析
备注:客户需提供目的基因名称、NCBI编号及合格的DNA/cDNA待测样品


2、CRISPR/Cas9:gRNA载体构建

服务内容 周期 交付内容
gRNA设计及合成 2周 ·3个gRNA构建
·10ug/载体研究级别质粒DNA
·测序报告
·质粒结构图谱
·CoA
载体构建
·克隆至需求载体(非病毒载体/慢病毒载体)
·质粒测序
·质粒制备
备注:客户需提供目的基因名称、NCBI编号及DNA序列信息
      如需更多构建或大量质粒或高质量质粒,请在需求信息表中写明


3、CRISPR/Cas9:基因敲除细胞系构建

服务内容 周期 交付内容
gRNA设计、合成及构建 2-3周 ·KO单克隆细胞株
·gRNA靶点序列及目标区域测序报告
·CoA
·gRNA设计及合成
·克降至需求载体(非病毒载体/慢病毒载体)
·质粒测序及制备
病毒制备(针对慢病毒载体) 1-2周
转染 2-3周
·瞬时转染或病毒侵染
·FACS分选
单克隆制备及细胞建库 5-8周
·单克隆制备
·PCR鉴定
·测序分析
·细胞建库
鉴定(可选) 2-3周
·qPCR
·Western Blot
备注:客户需提供目的基因名称、NCBI编号及DNA序列信息
      如需更多克隆,请在需求信息表中写明


4、CRISPR/Cas9:基因敲入细胞系构建

服务内容 周期 交付内容
gRNA设计、合成及构建 2-3周 ·KI单克隆细胞株
·gRNA靶点序列及目标区域测序报告
·KI同源臂序列
·CoA
·gRNA设计及合成
·载体构建
·质粒测序及制备
转染 2-5周
·瞬时转染
·FACS分选
单克隆制备及细胞建库 6-10周
·单克隆制备
·PCR鉴定
·测序分析
·细胞建库
鉴定(可选) 2-3周
·qPCR
·Western Blot
备注:客户需提供目的基因名称、NCBI编号及DNA序列信息
      如需更多克隆,请在需求信息表中写明

 


二、重组蛋白表达服务
北京义翘神州提供从基因合成、载体构建到蛋白表达及纯化的一站式服务。目前义翘拥有近百个2L到1000L不同体积的发酵罐和超过30种蛋白纯化体系,可以满足高通量及大规模的蛋白表达需求。自2007年以来,已成功表达超过5000个毫克至克级的不同种属蛋白。

1、HEK293/CHO瞬时表达服务

 

服务内容 周期 交付内容
基因合成及密子优化(可选) 1-2周 ·测序报告
载体构建 1-2周
·克隆至优化的表达载体
·质粒测序
·大量质粒制备
表达及纯化 2-3周 ·可行性报告
·如表达可行,且QC检测后有剩余样品,提供0.1-0.5mg样品
·瞬时转染HEK293/CHO细胞
·蛋白纯化
·SDS-PAGE及UV分析
大量表达及纯化(可选) 2-3周 ·纯化蛋白
·SDS-PAGE报告
·CoA


2、HEK293稳定细胞株开发服务

服务内容 周期 交付内容
基因合成及密子优化(可选) 1-2周 ·测序报告
载体构建 2-3周
·克隆至表达载体
·质粒测序
·大量质粒制备
稳定细胞系构建 10-12周 ·鉴定报告
·2管细胞(1×106细胞/管)
·稳定转染及筛选
·鉴定(qPCR及/或FACS)
·亚克隆
·鉴定(qPCR及/或FACS)
·细胞建库
大量表达及纯化(可选) 2-3周 ·纯化蛋白
·SDS-PAGE报告
·CoA


3、CHO稳定细胞株开发服务

服务内容 周期 交付内容
基因合成及密子优化(可选) 1-2周 ·测序报告
载体构建 2-3周
·克隆至表达载体
·质粒测序
·大量质粒制备
瞬转表达评估 2周 ·评估报告
·瞬时表达
·ELISA及/或WB检测表达水平
稳定细胞株开发 12-20周 ·表达报告
·2-3株稳定克隆(可选)
·稳定转染及筛选
·MTX扩增及筛选
·高表达克隆筛选及稳定性筛选
·细胞建库
大量表达及纯化(可选) 2-3周 ·纯化蛋白
·SDS-PAGE报告
·CoA


4、原核蛋白表达服务

服务内容 周期 交付内容
基因合成及密子优化(可选) 1-2周 ·测序报告
载体构建 2-3周
·克隆至表达载体
·质粒测序
·大量质粒制备
表达及纯化 1-2周 ·可行性报告
·如表达可行,且QC检测后有剩余样品,提供1-3mg样品
·转化合适菌株
·小量表达及条件优化
·亲和纯化(上清)
·变性复性(包涵体)
·SDS-PAGE及UV分析
大量表达及纯化(可选) 2-3周 ·纯化蛋白
·SDS-PAGE报告
·CoA


5、杆状病毒-昆虫细胞蛋白表达服务

服务内容 周期 交付内容
载体构建 1-2周 ·测序报告
·克隆至表达载体
·质粒测序
·大量质粒制备
病毒包装及扩增 2周
·病毒包装
·病毒扩增
表达及纯化 2-3周 ·可行性报告
·如表达可行,且QC检测后有剩余样品,提供0.1-0.5mg样品
·病毒侵染细胞
·小量表达、纯化及条件优化
·SDS-PAGE及UV分析
大量表达及纯化(可选) 2-3周 ·纯化蛋白
·SDS-PAGE报告
·CoA


6、酵母蛋白表达服务

服务内容 周期 交付内容
基因合成及密子优化(可选) 1-2周 ·测序报告
载体构建 1-2周
·克隆至表达载体
·质粒测序
·大量质粒制备
载体线性化及转化 1周
·载体线性化
·转化线性化载体至合适的菌株
·PCR鉴定阳性转化株
·高拷贝转化子筛选
表达及纯化 1-2周 ·可行性报告
·如表达可行,且QC检测后有剩余样品,提供0.1-0.5mg样品
·小量表达、纯化及条件优化
·SDS-PAGE及UV分析
大量表达及纯化(可选) 2-3周 ·纯化蛋白
·SDS-PAGE报告
·CoA

 


抗体服务
北京义翘神州拥有先进的抗体开发与生产技术平台,包括抗体文库技术和杂交瘤技术,提供从抗原设计、制备、动物免疫、抗体纯化、配对抗体以及 ELISA试剂盒开发的一站式技术服务。自2007年以来,已成功开发并生产了超过20,000株不同应用的抗体。

1、抗原制备服务

 

服务内容 周期 交付内容 备注
重组蛋白抗原制备
·请参阅重组蛋白表达相关服务内容
多肽抗原制备 4-6周 ·多肽序列
·2mg游离多肽
多肽抗原制备相关服务不单独提供,仅与抗体开发服务一同提供
·多肽设计
·多肽合成
·多肽偶联
客户提供抗原要求
蛋白抗原
总量 2.5-4mg/只免子 3-4mg/5只小鼠
分子量 >10kD
电泳纯度 >90%
浓度 >0.5mg/mL  
缓冲液 PBS或经义翘确认对实验无影响的溶液
多肽抗原
KLH/VLP偶联多肽 3-5mg/只免子 5mg/5只小鼠
浓度 >0.5mg/mL
OVA/Biotin标记多肽 2-3mg
浓度 >0.1mg/mL
缓冲液 PBS或经义翘确认对实验无影响的溶液


2、免多克隆抗体制备服务

服务内容 周期 交付内容 交付标准
抗原制备
客户可提供抗原或定制义翘神州抗原制备服务
抗原复核 1-2天 ·2×0.5mL/兔子免疫前血清
·纯化抗体(每只免子30-40mL血清将全部用于纯化)
·CoA
·剩余抗原
血清ELISA效价>1:64,000
·UV及SDS-PAGE分析
免疫及血清效价检测 8-10周
·免疫前采血
·2只兔子免疫
·血清效价检测
·最终采血
纯化(可选,依客户要求选择纯化方法) 3天
·蛋白A亲和纯化
·抗原亲和纯化
QC鉴定 3天
·SDS-PAGE及UV分析
·ELISA鉴定
备注:如需免疫更多免子或需求ELISA应用之外的特殊应用抗体,请在需求信息表中写明


3、鼠单克隆抗体制备服务

服务内容 周期 交付内容 交付标准
抗原制备
客户可提供抗原或定制义翘神州抗原制备服务
抗原复核 1-2天 ·2株阳性克隆
·每个克隆0.1-0.5mg纯化抗体
·每个克隆2管冻存细胞
·CoA
·剩余抗原
在ELISA检测中,纯化抗体与免疫原结合
·UV及SDS-PAGE分析
免疫及血清效价检测 8-10周
·免疫前采血
·5只Balb/c小鼠免疫
·血清效价检测
·最终采血
融合及筛选 4-6周
·融合及筛选
·亚克隆及细胞扩增
·细胞建库
抗体生产及纯化 2-3周
·适当规模的杂交瘤细胞培养
·蛋白A纯化抗体
QC分析 3天
·SDS-PAGE及UV分析
·ELISA鉴定
如需免疫更多小鼠或需求ELISA应用之外的特殊应用抗体,请在需求信息表中写明


4、兔单克隆抗体制备服务

服务内容 周期 交付内容 交付标准
抗原制备      
客户可提供抗原或定制义翘神州抗原制备服务      
抗原复核 1-2天 ·1株阳性克隆的抗体重链及轻链序列
·0.1-0.5mg纯化抗体
·分别含有抗体重链、轻链的商业表达载体
·CoA
·剩余抗原
在ELISA检测中,纯化抗体与免疫原结合
·UV及SDS-PAGE分析
免疫及血清效价检测 8-10周
·免疫前采血
·2只兔子免疫
·血清效价检测
·最终采血
建库及筛选 4-6周
抗体生产及纯化 2-3周
·载体构建
·HEK293细胞瞬转表达
·蛋白A纯化抗体
QC分析 3天
·SDS-PAGE及UV分析
·ELISA鉴定
如需免疫更多免子或需求ELISA应用之外的特殊应用抗体,请在需求信息表中写明


5、杂交瘤细胞培养及抗体生产服务

服务内容 周期 交付内容
细胞复苏 1-2天 ·纯化抗体
·SDS-PAGE报告
·CoA
·细胞复苏及细胞计数
细胞驯化 4-6周
·细胞驯化至无血清或低血清培养
·流加工艺开发
生产及纯化 6-10周
·适当规模的杂交瘤细胞培养
·蛋白A/G纯化抗体
QC分析 3天
·SDS-PAGE及UV分析
备注:客户需提供数量≥1×106的杂交瘤细胞


6、杂交瘤细胞抗体基因提取服务

服务内容 周期 交付内容
·RNA提取 3-4周 ·抗体重链及轻链序列
·分别含有抗体重链、轻链的商业表达载体
·反转录
·PCR扩增重链及轻链序列
·测序验证
·载体构建
备注:客户需提供数量>1×107的杂交瘤细胞


7、微重组抗体生产服务

服务内容 周期 交付内容
基因合成及密子优化(可选) 1-2周 ·纯化抗体
·SDS-PAGE报告
·CoA
载体构建 1-2周
·分别克隆抗体重链、轻链至优化的表达载体
·测序验证
·大量质粒生产
表达及纯化 1-2周
·瞬时转染HEK293/CHO细胞
·纯化抗体
·精细纯化(依据需求进行)
QC分析 3天
·SDS-PAGE及UV分析
·HPLC-SEC纯度分析及内毒素测定(可选)
备注:客户可提供抗体序列成质粒
      如需高纯度和/或低内毒素等高质量抗体,请在需求信息表中写明


8、抗体人源化服务

服务内容 周期 交付内容
人源化设计 1-2周 ·3株亲和力更好的纯化人源化抗体,每株0.2-0.5mg
·抗体序列
·CoA
·抗体序列分析
·抗体3D结构建模
·CDR结构分析
·人源化突变体设计
基因合成及密子优化 1-2周
载体构建 1-2周
·分别克隆抗体重链、轻链至优化的表达载体
·测序验证
·大量质粒生产
表达及纯化 2-3周
·瞬时转染HEK293细胞
·纯化抗体
·SDS-PAGE及UV分析
亲和力分析 1-2周
利用 ELISA法及Octet测定亲和力
备注:客户需提供抗体序列和抗原蛋白
      如高纯度和(或)低内毒素等高质量抗体,请在需求信息表中写明


9、ELISA试剂盒开发服务

服务内容 周期 交付内容
抗体制备
客户可提供抗体或定制义翘神州抗体制备服务
ELISA试剂盒开发 6-12周 ·ELISA试剂盒
·CoA
·抗体标记
·抗体配对筛选
·方法开发及优化
·试剂盒生产

 


三、生物分析服务
北京义翘神州提供一系列的生物分析服务支持您的临床前生物药物发现及研发。义翘拥有先进的生物分析平台和技术,可以提供方法开发、方法验证和样品分析的一体化服务。

1、蛋白/抗体表征分析服务

 

类别 检测项目 检测方法
纯度和浓度 纯度分析 SDS-PAGE/SEC-HPLC/毛细管电泳法(还原和非还原)
电荷异质性分析 CEX-HPLC
蛋白A残留量 ELISA
外源性DNA残留量 实时定量PCR法
宿主细胞蛋白残留量 ELISA
MTX残留量 RP-HPLC
浓度分析 UV/BCA/Lowry/ELISA
一级结构 相对分子量 SDS-PAGE/毛细管电泳法(还原和非还原)/LC-MS
等电点 毛细管电泳法
疏水性测定 HIC-HPLC
肽图分析 RP-HPLC
质量肽图分析 RPLC-ESI/MS
抗体糖型分析 HILIC-HPLC/MS
N糖基化位点 LC-MS/MS
N端与C端测序 LC-MS/MS
序列覆盖率 LC-MS/MS
翻译后修饰分析 LC-MS/MS
高级结构 二硫键分析 LC-MS/MS
蛋白质二级结构分析 圆二色谱/荧光光谱
热隐定性 DSF
粒径分析 动态光散射法
聚合物分析 非对称场流分析
巯基检测 ELLMAN试剂法
安全性 细菌内毒素检查 凝胶法/动态浊度法
异常毒性检查 小鼠试验法
无菌检测 薄膜过滤法/直接接种法
支原体检测 直接培养法/指示细胞法
外源性病毒检测(体外) 细胞直接观察法/不同细胞传代培养法(含血吸附和血凝集)
结合活性 FcRn,C1q,FcγR结合 生物膜干涉技术/ELISA
生物活性 ADCC/CDC效应,细胞功能检测 细胞学ADCC/CDC检测,増殖/存活/细胞凋亡检测等


2、免疫学检测分析

服务项目名称 服务报价 时间
Western Blotting检测服务(含内参) 1000元/张膜(8个样品) 1-2周
Sally Sue高通量WB检测服务(含内参) 180元/样本,每次试验收取400元开机费 1-2周
石片免疫组化检测服务 组织处理与蜡块制作:30元/个 1-2周
石蜡切片:10元/片
IHC检测:60元/张
(包含图片采集,40倍视野1张,100倍视野1张)
IHC图片采集(Leica SCN400全片扫描):100元/张
免疫荧光检测服务 细跑爬片:100元/张 3-5个工作日
免疫荧光染色:100元/张(单标);
200元/张(双标)
拍照、分析:普通100/张
共聚焦开机费:200元(>10张免开机费)
拍照:150/张
ELISA检测服务 500元/板 3-5个工作日
流式检测服务 上机检测:50元/管 2-4个工作日
细胞表面/胞内/核内梁色/细胞凋亡检测+上机检测
+数据分析:70元/管


四、生物药物研发服务
北京义翘神州拥有自主知识产权的综合生物药物研发平台,可提供从抗体候选药物的发现、工程化改造,大规模制备到生物分析和工艺开发的一站式研发和生产服务。

目录 生物药物研发服务
抗体工程技术 抗体人源化服务
抗体亲和力成熟服务
噬菌体文库构建及筛选
抗独特型抗体开发服务
抗体片段生产服务
双特异抗体生产服务
生物药分析 理化检测
细胞功能学检测
体内药效学评估
生物工艺 瞬时表达
细胞系开发
工艺开发
制剂开发
GMP生产


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