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Axion Maestro Z实时无标记细胞分析仪
——评价免疫细胞效价、监控细胞毒性动态


北京泽平代理的美国Axion公司Mastro Z实时无标记细胞分析仪,是基于阻抗技术研发的第三代无标记、实时、非侵入式细胞分析设备,于2019年秋季上市,其培养检测一体机设计、强大的全自动数据分析,成为长时间不间断细胞检测的有力工具。

Maestro Z实时无标记细胞分析仪 授权代理商 北京泽平

高精准度——提供三个频率下的实时参数,可以更清晰、更精确地了解细胞当前动态变化,例如细胞数量(细胞死亡)、细胞屏障(细胞间紧密连接被破坏)、GPCR离子通道(细胞外形可能变化)等;
全自动分析——内置强大的AxIS-Z数据分析软件,无需人工计算,可实时得到KT50(半数杀伤时间)、柱状图、增殖、凋亡曲线等;
数据安全——Maestro Z自带500G存储空间,数据实时自动保存,双通路备份检测,确保重要数据不丢失;
数据合规——符合FDA颁布的21CFRPart 11,确保数据的合规,以备审查;
一体设计——内置智能环境仓,可在超净台里操作,无需额外CO2培养箱,节省空间。
    
追踪免疫T细胞介导的细胞死亡

神经胶质瘤是一种恶性脑肿瘤,人体免疫系统中的效应T细胞,有着高特异性和固有的细胞毒性,在未来的脑胶质瘤研究中被人们寄予很高的期望。Maestro Z的阻抗测试有着高灵敏、无标记及无损的特点,为连续监控肿瘤细胞增殖和免疫细胞介导的细胞毒性提供了可能,因而被用来评估免疫效价。

Maestro Z实时无标记细胞分析仪 授权代理商 北京泽平
如左图所示,我们将恶性胶质母细胞瘤细胞株U87MG,以三种不同的细胞密度及四重复的形式,分成12个样本种到CytoView-Z阻抗板内。使用Maestro Z对其阻抗值变化持续监测24小时后,以10:l的比例将被激活的人T细胞加入到这些样本孔内,后续能够观察到阻抗值的降低。这和预期中的T细胞介导U87细胞裂解效应是一致的。对比之下,那些未经处理的肿瘤细胞样本(浅蓝色显示),某同时段测得的阻抗值则继续上升。

 

中图显示了在这三种处理条件下(不同的T细胞数量)检测到的实时细胞裂解比例。在这基础上,我们就能如右图所示,对每种处理方案的KT50值(裂解50%肿瘤细胞所需时间)进行计算。可以看到,要达到更快的U87MG细胞杀伤速度,我们就需要更高的T细胞密度。

 

细胞毒性的动态研究
当需要测试新药时,传统的终点法实验只能区分细胞样本的死活,而无法了解细胞反应的动态过程并对背后的机理做出解释。Maestro Z所提供的无标记、非侵入的连续监控能力,得以捕捉到细胞毒性的全程。不仅能看到毒性的程度,还能揭示其动态学和细胞死亡的速率。通过这些细胞反应的动态表现,更容易洞悉一个药物的效力及作用机理。

Maestro Z实时无标记细胞分析仪 授权代理商 北京泽平
例如用Doxorubicin(阿霉素)处理A549细胞(人非小细胞肺癌细胞)后,阻抗测试揭示了样本的动态反应(左图为实时连续检测结果,中图为虚线处单个时间点的读数)。在同一块板上,我们可以将Doxorubicin处理组的阻抗数据和细胞生长组(未加药对照)及细胞死亡组(加入Tergazyme清洁剂)的相关数据做比对,从而得知Doxorubicin导致细胞溶解比例的实时效应,并能够覆盖药物反应的整个过程。

 

细胞样本专属功能档案
基于各自不同的生物学功能,细胞样本间的生长、贴附及互作会有所不同。这些特性共同构成了一个独特的细胞档案。Maestro Z可以记录这些信息,并基于细胞各种特性(如种类、密度、形态和贴附)的不同来将它们分开归档。细胞功能档案可被用于细胞质控、纯度分析、量化生长速率和优化实验启动时间点等方面。这些功能的实现无需复杂的实验设定和分析。只需一个按键,Maestro Z系统就能稳定测试环境,长时间非侵入地监测细胞,提供实时的生长曲线和简明的终点圈示。

Maestro Z实时无标记细胞分析仪 授权代理商 北京泽平

我们将Hela细胞按照不同密度种入Maestro Z系统专用的CytoView-Z阻抗测试板内,并对其贴附、伸展及增殖的不同生长阶段开展监测。如左图所示,可以看到对应于这些阶段的实时阻抗记录。其中任意时间的终点数据(如第16个小时)都可以以柱状图的形式单独表示出来(如中图)。而从右图可以看出Hela、A549、Calu-3这三种不同细胞的生长曲线都不尽相同。


感知受体介导的快速信号传导
经由信号传导通路,细胞能够接收外界的信息。胞外信号分子与细胞表面的对应受体结合后,细胞内的信号传导就会被触发,并最终决定细胞的行为。跨膜受体中的最大家族是G蛋白偶联受体(GPCRs)。被结合后,它们将导致细胞构象的改变并引起下游的一系列反应。这些细微的变化通常发生迅速,但其对细胞生理的重大影响却能够持续几分钟至几个小时。通过阻抗检测,我们能够将其捕获并量化。Maestro Z的高灵敏度及连续监测特性,赋予您测试细胞信号传导动态的能力,无论这个过程有多久。

Maestro Z实时无标记细胞分析仪 授权代理商 北京泽平
如左图所示,我们将Calu-3细胞培养在阻抗检测板中,随后加入不同浓度的异丙肾上腺素(一种强效β肾上腺素受体拮抗剂,图中青色所示),并观察阻抗值的实时变化。如果我们将20分钟时间点的数据做成柱状图(如中图所示),可以看到最高药物浓度组的阻抗值在那时已经降到了最低,而最低药物浓度组则已经回复到了基线值。我们还可以探索不同机理的化合物对于细胞信号传导的不同作用。如右图所示,橙色标识的组胺处理组(100µM)很迅速地出现了短时间的阻抗值降低;而灰色标识的细胞松弛素处理姐,由于其细胞周期停止及肌动蛋白合成受抑制,则表现出前高后低的阻抗变化规律。


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——Maestro Z授权代理商,北京泽平

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