Axion CytoSMART Lux3箱内全自动活细胞成像系统（原Lonza CytoSMART活细胞成像仪），为荷兰进口细胞成像仪，体积小巧，可方便地用于二氧化碳培养箱内，在明场、荧光通道下对细胞培养进行监测，并通过拍摄高品质细胞图像、延时摄影、快速可靠的数据处理软件，实现对样本形态及行为变化的实时可视化分析。



 

CytoSMART Lux3细胞成像仪优势

1、体积小巧

所有硬件和电子器件都能在5~40°C及20~95%的湿度环境下运行。更小尺寸，重量1.3kg，箱内移动无压力，空间占用少。

2、操作简单

step-by-step引导式实验流程设定，点击即自动呈现数据、图片或影像，照片上传国内云端服务器，进行图像数据分析。即插即用，无需安装调试，无易损模块，无需维护。

3、高品质图片

LED光源位于样本上方，数据采集由样本台下方的可变焦镜头完成，640万像素CMOS成像，10倍镜下0.7μm/像素的超高分辨率，只使用CMOS 67%的核心区域成像，避免畸变困扰。

4、方便拓展

可多台并联，提升实验通量和平台共享能力。一拖四，单台终端即能实现实验室集约管理。

5、兼容各类细胞培养容器

可使用任何高度小于55mm（样本台到光源下沿的距离）的透明培养容器，如6~384孔多孔培养板、培养皿、T25~T225培养瓶等。

 

 

CytoSMART Lux3细胞成像仪应用

支持明场、以及红色和绿色荧光双通道细胞计数，可对样本中被荧光标记细胞的数量和大小进行定量计算，并开展长期追踪。

1、转染与转导

CytoSMART Lux3优秀的成像能力和机器学习算法，可对荧光报告基因载体的表达进行直接观测和定量测定。
 


实验样本为HepG2细胞，使用了BacMam表达系统进行转导。通过图像数据自动分析，软件给出了细胞覆盖度和荧光标记计数的实时结果。蓝色对应整体样本，绿色和红色对应其中表达了BacMam-Actin-GFP及/或BacMam-Nucleus-RFP的那部分细胞。可以看到从转染后第7小时开始，红色和绿色荧光蛋白的表达一直呈现迅速升高的趋势，且过夜以后仍然未见衰退，虽然此时细胞的增殖已经进入平台期。而且转导表达会先发生在细胞骨架中，那里表达的蛋白量也高于细胞核。这些数据结合影像，提供了综合性的转导质控依据。
 



 

2、细胞汇合变化 

支持在2D培养体系中计算被细胞覆盖的表面占比，提供高效、保真的细胞汇合度分析。基于图像的自动捕获及计算，自动生成报告展示细胞覆盖度（%，成像范围内总的细胞覆盖度，当使用荧光成像时，分别给出红色及绿色荧光的覆盖度）、汇合比例（%，发出绿色及红色荧光物体各自的覆盖度）数据。应用于在无标记或荧光标记实验中计算细胞汇合度、确定合适的细胞传代时间点以维持细胞表型及培养质量、药物处理后细胞汇合度及活力评估、设定提醒内容告知何时完成细胞传代等。CytoSMART Lux3自动对细胞活力和增殖过程进行追踪并给出定量分析，提高实验的效率和可重复性。
 


 

3、划痕/迁移跟踪

支持观察划痕实验，可在实验全程中无标记地检测细胞的迁移，实时观察并定量检测伤口闭合或者是细胞侵袭的过程，以评估药物处理及条件改变对于迁移过程中细胞的影响等。系统可自动选定无细胞区域（即划痕），并定量计算该缺口闭合及细胞迁移的速度，提供划痕面积（μm2，变化中的划痕面积）、速度（μm2/s，细胞迁移速度）等数据。
 


 

4、细胞凋亡

结合特定凋亡通路的荧光标记，Lux3可以在监控样本动态变化的过程中，提示凋亡事件发生的时间顺序或通路依赖性。
 


绿色荧光染料pSIVA-IANBD能结合外翻的细胞膜中磷脂酰丝氨酸（PS），从而提示早期的凋亡发生；而PI则是常用的细胞核红色荧光染料，它能指示凋亡过程的终结。在两组CHOK-1细胞样本中加入上述两种荧光染料后，并联使用两台Lux3，进行了间隔为10分钟的连续摄像并一直持续到第24小时。图中的上层为空白对照组的延时成像结果，下层为同时间点经0.6mM H2O2处理发生了细胞凋亡的实验组的成像结果。通过对荧光区域的定量识别，CytoSMART云端计算能分析得到并自动生成两个样本各自的凋亡指数曲线，为凋亡研究提供重要的判断依据。
 


5、单细胞示踪

在ibidi μ-Slide channel板中观察细胞对FBS的浓度变化是否做出趋向性运动。HeLa细胞上样时培养基中FBS的浓度为10%。在相邻的两个Channel中则分别添加20%和0% FBS浓度的同种培养基，在这样的FBS浓度梯度环境中，细胞是可以移动的。另设一块趋化板作为对照组，其中不同部位的FBS浓度均为10%。该实验并联使用了两台Lux 3，以每5分钟拍摄一次的频率连续采样24小时。随后以图片为原始数据，使用CytoSMART单细胞识别功能及第三方软件的追踪功能，来对每个细胞的运动轨迹进行统计学分析。结果发现，HeLa细胞在FBS浓度恒定的环境中会在更大范围内做均匀分散；而在具有FBS浓度差的环境中，其运动范围则更为集中，而且存在向更高浓度区域运动的倾向。
 

 

 

参考文献

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