Cyitva Ficoll人淋巴细胞分离液
——密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞PBMC

北京泽平代理瑞典进口思拓凡Cytiva（原GE Healthcare Life Sciences，GE）Ficoll淋巴细胞分离液（Ficoll分层液），包括Ficoll-Paque PLUS、Ficoll-Paque PREMIUM、Ficoll PM400等全系列密度梯度分离液和干粉原料，提供生命科学实验室基础研究级别、GMP级别人淋巴细胞分离液，并提供100mL、500mL等多种规格。
（图）

Cytiva（原GE）Ficoll淋巴细胞分离液利用密度梯度离心法原理，大量用于从骨髓、血液（外周血、脐带血）中分离提取白细胞中的淋巴细胞、单核细胞、人外周血单个核细胞PBMC，即白膜层，或提取白细胞中的中性粒细胞，去除红细胞、血小板等。Cytiva（GE）Ficoll淋巴细胞分离液上市50余年，拥有海量的文献支持。
（google图）

Cytiva（GE）Ficoll淋巴细胞分离液由多聚蔗糖Ficoll PM400（分子量为400,000的高分子量蔗糖与表氯醇的聚合物）、泛影酸钠、EDTA二钠钙组成。Ficoll分离液为即用型无菌溶液，提供1.077g/mL、1.073g/mL、1.084g/mL固定密度，适用于人、小鼠、大鼠的血液和骨髓样本。

  
Cytiva（GE）Ficoll淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离细胞原理

在梯度介质中，样品中不同颗粒密度不同，因此在一定离心力下，不同密度颗粒可沉降至特定位置，从而进行分离。

·沉降速率与颗粒大小成正比；
·沉降速率与颗粒和周围介质的密度差成正比；
·当颗粒密度与周围介质的密度相等时，沉降速率为0；
·随着介质粘度的增加，沉降速率降低；
·随着离心力的增加，沉降速率随之增加。

（分离管形象图+提取pbmc形象图）

Cytiva（GE）Ficoll-Paque PLUS/Ficoll-Paque PREMIUM 淋巴细胞分离液优势

·高活性：高效分离人淋巴细胞，细胞活率＞90%，保持B淋巴细胞、T淋巴细胞的活力。

·高回收率：回收产物中单个核细胞占比达95%±5%，其中原始血样中的淋巴细胞回收率为60%±20%，粒细胞3%±2%、红细胞5%±2%、血小板总数<0.5%。

·低内毒素：内毒素水平低，<0.12EU/mL，并进行了测试。

·GMP级别：Ficoll-Paque PREMIUM 淋巴细胞分离液生产符合ISO13485质量管理认证，满足美国药典章节<1043>相关规定，细胞毒性等级为0级，可提供监管支持文件（RSF文件）。

·使用方便：即开即用，已灭菌。

·选择多样：提供3种不同密度，适配不同样本，其中1.077g/mL适合常规单个核细胞分离，1.073g/mL适合分离低密度人单个核细胞、间充质干细胞MSC，1.084g/mL适合分离高密度人单个核细胞、小鼠或大鼠淋巴细胞。

·结果可靠，文献丰富：Ficoll细胞分离液上市＞50年，技术成熟，结果可靠，可提供海量文献参考，技术支持强大，助力实验快速推进。

重改表

Cytiva（GE）Ficoll分离液分离细胞步骤

1、用Ficoll从血液分离单个核细胞步骤

①样本准备
a. 在10mL离心管中加入2mL抗凝血、2mL平衡盐溶液；
b. 将血液与平衡盐溶液颠倒混匀，或用移液枪吹打混匀。

②分离单个核细胞
a. 将Ficoll细胞分离液充分混匀；
b. 取一支离心管，加入3mL Ficoll-Paque溶液；
c. 小心地在Ficoll溶液上加入稀释的4mL血液样品；
d. 18~20℃条件下，400×g离心30~40min（离心机brake功能须关闭）；
e. 吸除上层血浆及血小板层；
f. 小心吸出单个核细胞层，并放置在另一个离心管中。

③清洗分离的细胞
a. 在含有单个核细胞层的离心管中加入3倍平衡盐溶液（6mL）；
b. 用移液器缓慢吹打混匀细胞；
c. 18~20℃条件下，400~500×g离心10~15min；
d. 去除上清液，在6~8mL平衡盐溶液中重悬细胞；
e. 18~20℃条件下，400~500×g离心10min；
f. 去除上清液，并在合适的溶液中重悬细胞。

（分离单个核细胞图）

2、用Ficoll从血液分离粒细胞步骤

①样本准备
与用Ficoll从血液分离单个核细胞相同。

②分离粒细胞
a. 按Ficoll分离单个核细胞步骤，将单个核细胞层吸除；
b. 将Ficoll溶液层吸除，留下层的粒细胞层和红细胞层；
c. 收集白色的粒细胞层，并转移到一个新的离心管中；
d. 用至少5倍体积的平衡盐溶液重悬细胞，400×g离心15min；
e. 用红细胞裂解液裂解粒细胞中可能残留的红细胞；
f. 18~20℃条件下，400~500×g离心10~15min；
g. 去除上清液。

③清洗分离的细胞
a. 在6~8mL平衡盐溶液中重悬粒细胞；
b. 18~20℃条件下，400~500×g离心10~15min；
c. 去除上清液，并在合适的溶液中重悬细胞。

（分离粒细胞图）

3、用Ficoll分离大体积血液样本步骤

【方法一】
与用Ficoll从血液分离单个核细胞步骤相同，增加管子直径，保持同样的Ficoll页面高度（2.4cm）和血液样品页面高度（3.0cm），分离时间相同。增加血液样品高度可能会增加红细胞污染，增加管子直径不会影响分离时间。

【方法二】
①用PBS（pH7.2，2mM EDTA）2~4倍稀释样品；
②取50mL离心管，加入15mL Ficoll，然后在上面小心加入35mL稀释样品；
③20℃条件下，400×g离心30~40min；
④小心吸除上层，并将单个核细胞层转移到一个新的50mL管中；
⑤在管中加入PBS，混合后，20°C条件下300×g离心10min，然后小心去除上清液；
⑥如需去除血小板，用50mL PBS中重悬细胞，20°C条件下200×g离心10~15min；
⑦重复步骤⑥。

4、用Ficoll从骨髓中分离单个核细胞步骤

①将人骨髓与PBS（pH7.2，2mM EDTA）以6:1的比例混合（例如30mL骨髓加入5mL PBS）；
②用100μm滤器过滤混合液；
③取50mL离心管，加入15mL Ficoll，然后在上面小心加入35mL稀释样品；
④20℃条件下，445×g离心35min；
⑤小心吸除上层溶液，并将单个核细胞层转移到一个新的50mL管中；
⑥在管中加入PBS至40mL，混合后，20℃条件下300×g离心10min，小心去除上清液；
⑦如需去除血小板，用50mL PBS中重悬细胞，20℃条件下200×g离心10~15min；
⑧重悬细胞用于下游实验。

5、用Ficoll从骨髓中分离骨髓间充质干细胞MSC步骤

①将人骨髓与PBS（pH7.2，2mM EDTA）以1:1的比例混合（例如8mL骨髓加入8mL PBS）；
②在15mL离心管中，加入3mL Ficoll（1.073g/mL），在上面小心加入4mL稀释样品；
③20℃条件下，450×g离心30min；
④小心吸除上层，将单个核细胞层转移到一个新的50mL管中；
⑤在管中加入PBS至40mL，混合后，20℃条件下300×g离心10min，小心去除上清液；
⑥重悬细胞用于下游实验。

Cytiva（GE）Ficoll分离液使用注意事项

1、温度
必须为18~20℃。

2、样本
①血液样品必须新鲜，采集后24h内使用；
②通常需将样本进行1:1稀释。

3、操作
①使用水平转子离心机，关闭制动功能；
②将稀释后的血液小心地添加在Ficoll分离液上面，不要让血液冲破Ficoll分离液的液面，尽量平稳。

FAQ

1、Ficoll分离后得到的淋巴细胞中有较多红细胞污染？

①温度太低，Ficoll-Paque是一种密度梯度离心介质，在低温条件下，Ficoll-Paque本身的密度较高，红细胞的聚集效果较差，红细胞和粒细胞不能很好地穿透Ficoll-Paque层而造成污染。合适的分离温度应保持在18~20℃。

②离心速度不够或离心时间过短，必须达到足够的离心时间及离心力，不同细胞才能实现合适的分层。

2、Ficoll分离提取单个核细胞的得率较低，且活性较差？

温度过高，在温度较高的情况下，Ficoll-Paque产品的密度较低，某些淋巴细胞可穿透Ficoll-Paque层，细胞的活性也同时受到影响。合适的分离温度应保持在18~20℃。

3、Ficoll分离提取单个核细胞的得率较低，但活性正常？

血液样品与平衡盐溶液未按照1:1稀释，样品中红细胞压积较高，大量淋巴细胞被阻截在红细胞聚集区内。建议对样品进行适当稀释。

4、Ficoll分离提取单个核细胞的得率较低，且带有粒细胞污染？

离心机不稳定，导致密度梯度的波动，使单个核细胞层的条带变宽，与底层细胞混合。建议检查离心机是否配平，并检查离心机状态。

5、Ficoll分离提取单个核细胞得率较低，活性较差，且存在其他细胞污染？

可能存在其他人类血液样品、陈旧血液样品、非人类血液样品、非外周血样品等污染。建议采用Cytiva Percoll PLUS 细胞分离液，分离效果可能更好。

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——Cytiva一级代理商，北京泽平